本指导原则旨在指导注册申请人对心肌肌钙蛋白I/肌红蛋白/肌酸激酶同工酶MB（以下简称“心梗三项”）检测试剂盒（胶体▓金免疫层析法）注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供▅参考。
本指〓导原则是对心梗三项检测试剂盒（胶体金免【疫层析法）的一般要求，申请人应依据具体产品的特性对注册申报资料的内容进行充实和细化，并依据产品特性确定其中的具体内容是否适用。
本指导原则是对申请人和ζ 审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制【执行，如果≡有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下◇制定的，随着法规和标■准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
一、适用范围
心梗三项检测试剂盒（胶体金免疫层①析法）是指利用胶体金免疫层析法对人血清、血浆、全血ω样本的心梗三项指标（包括心肌肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶MB）进行体外定性〖分析的试剂盒，包括此三项指标的独立检■测或任意组合产品。
从方法学考虑，本指导原则是指利用基于抗原抗体反应原理的胶体金免疫层析法对心梗三项进行检测的体外诊断试剂，不适用于定量或半定量产品。
依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国□ 家食品药品监督管理总局令第5号）（以下简称《办法》）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械︻管[2013]242号），心梗三项检测试剂盒（胶体金免疫层析法）管理类别为▅Ⅱ类，分类代号为∩6840。
二、注册申报资料要求
（一）综述资料
综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、有♂关生物安全性的说明、研究结果的总结评价以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《办法》和《国家食品药品监督管理总局关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理①总局公告2014年第44号）的相关要求，下面着重介绍与心梗三项检测试剂盒预期用途有关的临床背景情况。
肌钙蛋白（Troponin）由▂肌钙蛋白I、T、C三亚基构成，它们和原肌球蛋白一起通过调节Ca2+对横纹『肌动蛋白ATP酶的活性来调节肌动▽蛋白和肌球蛋白相互作用。当心肌损♀伤后，心肌肌钙蛋白复合物释放到血液中，4-6小时后，可在血液中检测到升高，且升高的肌钙蛋白I能在血液中保持6-10天，提供了较长的检测期。心肌肌钙蛋白I（cTnI）具有高度▓的心肌特异性和灵敏度，所以已成为∑目前较理想的心肌梗死标志物。
肌红蛋白（Myoglobin，Myo）是由一条肽链和一个血红素辅基组成的结合蛋白，是肌肉内储存氧的蛋白质。胸痛发作后最快2小时即可出现升高；严重的充血性心力衰竭和心脏外▼科手术病人，由于△存在心肌损伤，所以也会升高。肌红蛋白是〗诊断急性心肌梗塞的敏感指标，所以肌红蛋白成为目前心肌梗死标志物之一。
肌酸激酶(Creatine Kinase，CK)有四种同工酶形式：肌肉型（MM）、脑型（BB）、杂化型（MB）和线粒体型（MiMi），其中MB型主要存在于心肌细胞中。心肌梗死时，肌酸激酶在发病6小时∮内升高¤㊣，24小时达高峰，3-4日内恢复正常，其中肌酸激酶同工酶MB诊断特︼异性较高，所以其成为目前心肌梗死标志物之一。
Myo是诊断急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）的早期较◥佳指标，cTnI是诊断AMI的高特异々性指标，CK-MB虽不如Myo早也不如cTnI敏感，但对AMI后早期再梗死的诊断有一定的价值。临床证明任何单项检测结果都■有误诊和漏诊的可能，联合检测则更有助于早期准确地诊断AMI。
注：应明确原材料中单抗的特异性要求，且内控品原料纯度要求不低于90%，适用时应提交基质效应研究资料。
（二）主要╳原材料研究资料（如需提供）
主要原材料（包括抗原、抗体及其他☆主要原料）的选择、制备、质量标准及实验验证研究资料；质控品的原料选◢择、制备、定值过程及试验资料等。
（三）主要生产工艺及反应体系的研究资料（如需提供）
1.主要生产工艺介绍，可以№图表方式表示；
2.反应原理（如双抗体夹心法）介绍；
3.确定抗原抗体反应条件（温度、时间、pH值等）研究资料；
4.样品加样方式及加□ 样量确定的研究资料；
5.其他：如基质液※的选择、样本稀释等；
（四）分析性能评估资料
申请人应提交在产品研制阶◤段对试剂盒进行的所有性能验证的研究资料，包括具体研究方法、试验数据、统计→方法等详细资料。申请人应按以下要求提供体外诊断试剂性能评估资料：
1.申请人名称；
2.性能评估方法、要求；
3.性能评估所使用试剂的名称、批号、有效期；
4.如涉及，应提供使用的仪器型号、序列号（SN）；
5.性能评估的时▽间、地点、检验人员；
6.性能评估的具体数据及分析判定；
7.性能评估审批人签字、审批时间。
对于本试剂盒，建议着Ψ 重对以下分析性能进行研究：
1.检出限及重复性
检出限是定性检测试剂盒的一项关键指标，其浓度点的选择︻应符合临床实际诊断意义。为了避免在临床应用时出现过多的“假阳性”结果，申请人在确定该产品的检出限时应结合其实际的临『界值，建议不应把两者浓度差设定的过大。在评价该项指标时，不但要验证检出限浓度点的阳性符合率情况，还要验证阴性参考品的符合情况。
申请人应根据产品性能验证的实际情况自行设置合∑ 理的企业内部参考品，应对△内部阳性/阴性参考品的来源、抗体浓度等信息进行验证。如申报产品有相█应的国家标准品，建议使用其配制相应浓度质控品进行验证。
2.分析特异性
（1）交叉反应
对抗原结构相近的物质进行交叉反应研究，如●心肌肌钙蛋白T、心肌肌钙蛋白C、骨骼肌型肌钙蛋白I、血红蛋白、肌酸激酶同工酶CK-MM及CK-BB等。申请人应提交所有用于交叉反应验证的抗原来源、浓度确认等信息。
（2）干扰物质
对样本中常见的内源性干扰物质进行检测，如溶血、高脂、黄疸、类风湿因子（RF）、抗核抗体（ANA）等。应对检测项目阴性、弱阳性的临床或模拟添加＠样本分别进行验证，说明样本的制备方法及干扰实验的评价标准，确定可接受的干扰物质极限浓度（结果应↑量化表示，禁用轻度、严◇重等模糊表述）。
3.Hook效应及样本稀释
Hook效应通常指在双抗体夹心实验中，由于标本中受检抗原的含量过高，过量抗原分别与固相抗体和酶标抗体结合，而不再形◣成“夹々心复合物▓”，从而影响检测结果，将高浓度错误报告为低浓度，出现高浓度后带现象，又称“钩状效应”。
须采用高浓度样本进行梯度稀释后由低浓度至高浓度开始检测，每个梯度ぷ重复3-5份，对钩状效应进行合理的验证。建议在产品说明书上明示对钩状效应的研究╳结果。
过度稀释可能改变基※质效应，申请人应对样本稀释液、合理的稀释比例进行相关研究以确认最佳稀释条件。
4.其他需注意问题≡
试剂盒的样本类型如包括血清、血浆和/或全血样本，则应对三者之▅间进行相关性研究以确认不同类型样本检测结果是否完全一致或存在某种相关性（如系数关系）。对于血浆/全血样本，申请人应对不同的抗凝剂进行研究以确认最适的抗凝条件以及是否会干扰⌒ 检测结果。
（五）阳性√判断值№确定资料
应提交验证阳性判断值所采用样本来源及详细的试验资料。
研究时，至少应包括①正常人群组以及与心梗疾病易混淆的干扰组（如高血压、糖尿病、肾脏疾病等），且应明确各组人群的筛选标准。应提交临界值及◢灰区上下限（C95、C5）确定的详细研究资料。
阳性判断值研究结果应在说明书【阳性判断值】项中进行相应说明。
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